Un test immunoenzymatique (ELISA) est une étude de laboratoire basée sur la spécificité et la haute sélectivité de la réaction immunologique antigène-anticorps. Il est courant de faire la distinction entre plusieurs dizaines de variantes d'ELISA. Le plus populaire est la phase solide hétérogène analyse immunitaire ou ELISA (dosage immuno-enzymatique).

Figure: 1

Test d'immunosorbant lié Il est utilisé à deux fins: si nécessaire, pour déterminer la présence d'antigènes de l'agent causal de toute infection, ou (ce qui est pratiqué beaucoup plus souvent) pour établir la présence d'anticorps des classes IgA, IgM, IgG contre l'antigène de l'agent causal de la maladie. Les anticorps contre presque toutes les infections génitales sont déterminés par ELISA.

Le principe du test d'immunosorbant lié à une enzyme est basé sur la réponse immunitaire d'un antigène avec des anticorps, lorsque, en attachant un marqueur enzymatique à des anticorps, le chercheur détermine les résultats de la réaction anticorps-antigène, en enregistrant l'apparition ou la modification du niveau d'activité enzymatique.

La première réaction est observée entre l'antigène purifié d'agents pathogènes (Ag) et l'Ig établie (Ab) en se fixant au plan des puits de la plaque d'immunologiste.

La deuxième réaction immunologique est réalisée afin d'identifier les complexes immuns émergents. Dans le rôle d'antigène, une Ig liée spécifique est utilisée ici, tandis que des anticorps sont utilisés conjugués - Ig (Ab) à une Ig humaine spécifique, qui est marquée avec l'enzyme K (peroxydase). La réaction enzymatique qui se produit après cela est catalysée par la partie enzymatique de la molécule conjuguée. Une substance incolore appelée chromogène est utilisée comme substrat de réaction; au cours de la réaction, le chromogène acquiert une couleur. La quantité d'immunoglobuline dans l'échantillon est déterminée par l'intensité de la coloration du puits.

À la fin de la réaction, le puits est photométrique, les résultats sont enregistrés à l'aide d'un appareil spécial. Le traitement mathématique des résultats de la recherche montre la présence et la quantité d'anticorps caractéristiques dans l'échantillon.

Pour les sérodiagnostics, une plaque de polystyrène à 96 puits est utilisée, sur les surfaces latérales des cellules dont l'antigène est adsorbé au préalable. Lorsque le sérum à tester est introduit dans les puits de la plaque, des anticorps homologues à celui-ci sont fixés à l'antigène. Ensuite, des anticorps marqués aux enzymes contre les anticorps humains (immunoglobulines) sont placés dans les puits. Si le sérum de test contient des anticorps détectables, ils apparaîtront comme des antigènes, avec lesquels les anticorps marqués réagiront. Le chromogène (colorant) ajouté après lavage permettra d'enregistrer la réaction par la coloration caractéristique des cellules. L'intensité de cette couleur sera proportionnelle à la fraction de l'enzyme et, par conséquent, à la quantité d'anticorps.

En mesurant la densité optique (DO) du liquide dans la cellule et en la comparant à l'échantillon modèle, la concentration d'anticorps par unité de volume est calculée. Le plus souvent, le résultat est calculé en unités OD. Il est caractéristique que chaque système de test soit équipé de ses propres indicateurs de pathologie et de norme, ainsi que d'indicateurs de comptabilisation des résultats, qui doivent être pris en compte lors de l'interprétation des résultats.

La vénéréologie moderne utilise la méthode de dosage immunoenzymatique, diagnostiquant la syphilis, l'hépatite virale, l'infection par le VIH. ELISA est également utilisé pour diagnostiquer les infections à cytomégalovirus et à chlamydia, infections d'origine herpétique. En utilisant le dosage immunoenzymatique, les anticorps sont déterminés pour toutes sortes de maladies infectieuses, le niveau d'hormones, de marqueurs du cancer, d'autoanticorps.

Il est connu que la détermination de la présence et du taux d'anticorps dans le sang lors du diagnostic initial des infections génitales n'est pas recommandée. Dans ce cas, se tourner vers la méthode de dosage immunoenzymatique sera tout à fait justifié. ELISA est tout à fait capable de reconnaître la syphilis. Il faut seulement se rappeler que la présence d'anticorps dans le sérum n'indique que les contacts du corps avec des agents pathogènes dans le passé ou à l'heure actuelle.

Valeria 2018-08-22 16:01:18

Le MRP est faiblement positif, alors que la syphilis a été traitée il y a 8 mois. Pourquoi peut-il y avoir un tel indicateur?

Consultez un syphilidologue. Les analyses pour contrôler la guérison de la syphilis se font dans un complexe (RPHA, immunoblot). Et des «traces» de ce diagnostic peuvent être présentes dans les analyses depuis de nombreuses années.

sanya 2018-08-19 13:02:00

si un 1-40 est positif et que la référence négative était malade et a été traitée, qu'est-ce que cela signifie?

Menshchikova Galina Vladimirovna Docteur dermatovénérologue, dermato-oncologue. Candidat en sciences médicales. Docteur de la première catégorie. Plus de 15 ans d'expérience répond:

ELISA pour quelle infection? Précisez s'il vous plaît.

Irina 25/07/2018 12:39:58

Bonne journée! En 2002, mon mari et moi avons eu la syphilis primaire. Je suis enceinte en ce moment. Nous avons réussi les tests: le cancer de la vessie est négatif, l'IgM est négatif, l'IgG est négatif, si un ssumarn est positif, RPHA 4+. Le médecin dit qu'il a besoin d'un traitement préventif en KVD à 20 semaines 6 injections par jour pendant 10 jours. Veuillez me dire si j'ai des indications pour un traitement aussi sérieux.

Bagaeva Madina Docteur dermatovénérologue, membre de la Société de Moscou des dermatovénérologues et cosmétologues du nom de M.V. A.I. Pospelova répond:

C'est un point très délicat, car de faux tests positifs sont possibles pendant la grossesse. La consultation d'un syphilidologue est requise.

Afin de déterminer le niveau de teneur en substances biologiquement actives telles que les complexes immunologiques, une étude de laboratoire spéciale est nécessaire. Si vous suspectez la présence d'une maladie hématologique, infectieuse ou auto-immune, les experts vous prescrivent un test sanguin pour ELISA. Au cours de l'article, nous examinerons ce que c'est, comment s'y préparer, ce qu'il montre et comment le déchiffrer nous-mêmes.

De quel type de recherche s'agit-il - un test sanguin pour ELISA? L'abréviation signifie un test d'immunosorbant lié à une enzyme, qui détermine le contenu quantitatif et qualitatif de diverses substances biologiquement actives, ainsi que des anticorps et antigènes dans un matériel biologique.

Qu'est-ce qui est utilisé pour le dosage immunoenzymatique du sang:

• liquide cérébro-spinal;
• mucus de l'urètre, canal cervical;
• liquide amniotique;
• le contenu du corps vitré.

Un test immunoenzymatique est prescrit pour diagnostiquer les maladies sexuellement transmissibles, les processus infectieux et oncologiques, les réactions allergiques, les troubles des systèmes endocrinien et reproducteur, les maladies auto-immunes et immunodéficitaires, ainsi que pour évaluer le risque de développer certains reins.

Un test sanguin pour ELISA pendant la grossesse est prescrit à des fins de détection précoce, des troubles du développement pour étapes initiales et le contrôle de leur dynamique. De plus, l'analyse ELISA vous permet de contrôler le niveau d'anticorps pouvant provoquer le développement de troubles neurologiques sévères chez un enfant, empêchant ainsi le développement de complications non seulement pendant la grossesse, mais également pendant l'accouchement.

Il permet de réagir à l'avance aux problèmes identifiés et d'améliorer considérablement la santé de la mère elle-même et de son bébé.

Les avantages du sang ELISA comprennent:

• degré de sensibilité élevé (jusqu'à 90%);
• la possibilité d'un diagnostic précoce, avec la détermination simultanée du stade de la maladie;
• faible coût des réactifs et, par conséquent, disponibilité;
• la quantité minimale de matériel pour la recherche;
• conditions minimales de réception;
• la possibilité de stockage à long terme des réactifs;
• la capacité de contrôler la dynamique du développement du processus pathologique.

Inconvénients du dosage immunoenzymatique:

• il est impossible de spécifier l'agent causal de la maladie, en laboratoire, seule la réponse immunitaire à celle-ci est reçue
• la possibilité d'obtenir un faux résultat (dans de très rares cas, principalement pendant la période de gestation).

Formation

Le principe de ce type de test sanguin est basé sur la formation d'anticorps spécifiques dans le corps humain lorsque des antigènes y pénètrent, c'est-à-dire des agents étrangers qui provoquent le développement d'une maladie particulière. Du fait de leur interaction, des complexes «antigène - anticorps» se forment, qui sont soumis à des recherches dans la mise en œuvre de tests immunoenzymatiques.

A cet égard, afin de ne pas affecter ces complexes et, par conséquent, la fiabilité des résultats obtenus, l'analyse du sang et d'autres matériels biologiques pour ELISA nécessite une certaine préparation.

De plus, 14 jours avant l'examen attendu, le traitement spécifique est suspendu et l'utilisation d'antibactériens et antiviraux est arrêtée.

Le sang pour ELISA est donné à partir d'une veine. Immédiatement avant le prélèvement sanguin, vous devez limiter l'activité physique et exclure le tabagisme et la consommation d'alcool.

Il existe plusieurs techniques et méthodes de dosage immunoenzymatique: directe et indirecte, compétitive et bloquante.

Au cœur de l'examen du sang (tout autre matériel biologique) en ELISA se trouve un algorithme consistant en la mise en œuvre de deux réactions - immunitaire et enzymatique.

Au cours de la première, des agents pathologiques se lient aux éléments protecteurs des cellules du matériel biologique prélevé pour la recherche. Un complexe immun antigène-anticorps se forme. Ça ressemble à ça. Les antigènes sont présents à la surface d'absolument toutes les cellules.

Lorsque des cellules étrangères pénètrent dans l'organisme, elles sont capturées par des cellules immunitaires (sur la surface desquelles se trouvent les anticorps), qui comparent les données sur les antigènes de la surface des cellules nouvellement arrivées avec les informations stockées dans leur propre «mémoire». En cas de non-concordance de ces données, les fonctions de protection du corps sont activées, consistant en la formation d'un complexe immunitaire.

Ensuite, une réaction enzymatique est effectuée, qui visualise les résultats de la réaction précédente. Son principe repose sur la transformation d'une substance de l'une à l'autre. Pour chaque type de matériel ELISA qui se forme au cours de la réaction immunitaire, il existe une certaine enzyme, dont le traitement est utilisé pour déterminer la concentration d'un agent étranger (par l'intensité de la couleur de la solution).

Décodage

Grâce à un test sanguin pour ELISA, les assistants de laboratoire déterminent A, G et M. Un résultat positif dans l'étude du sang (autres matières premières biologiques) pour ELISA permet non seulement de diagnostiquer, mais aussi le stade de la maladie, ainsi que la nature de son évolution (aiguë ou chronique).

Ces immunoglobulines, en présence d'un processus pathologique dans l'organisme du patient, se forment à différentes périodes de la maladie:

• Immunoglobulines M, IgM - se forment cinq jours après le début de la maladie et restent dans le sang pendant 1,5 mois, après quoi ils disparaissent. La détection des IgM indique la présence d'un processus pathologique primaire aigu dans le corps et la nécessité d'une intervention thérapeutique renforcée.
• Immunoglobulines G, IgG - surviennent quatre semaines après l'infection, leur présence dans l'organisme peut être détectée pendant plusieurs mois. La détection des IgG indique les antécédents d'une personne d'une maladie antérieure. Une augmentation de leur contenu peut également indiquer une réinfection.
• Immunoglobulines A, IgA - apparaissent au moment de l'infection et sont présents dans le corps pendant quatre semaines. Une diminution de leur contenu indique le début de la récupération. L'apparition dans les analyses à nouveau après que la personne a subi un traitement et récupéré indique le passage de la maladie à une forme chronique. La détection simultanée d'IgA et d'IgG dans les résultats ELISA indique également la présence d'un processus chronique dans l'organisme.

Il convient également de noter que la présence simultanée d'IgG et d'IgM dans les dosages indique que le processus chronique s'est aggravé et que le patient doit commencer le traitement. Si aucune des immunoglobulines n'a été détectée lors de l'examen, cela signifie qu'il n'y a pas de réponse immunitaire.

Avec le développement de sciences connexes telles que la génétique, la biologie moléculaire, la chimie, ainsi que la croissance du progrès technologique, la médecine moderne peut se vanter de méthodes innovantes pour diagnostiquer une grande variété de maladies humaines. Ils se distinguent par une grande précision des résultats et une sécurité d'exécution. L'un de ces moyens d'identifier les problèmes de santé est le dosage immunoenzymatique. Il a gagné en popularité au cours de la dernière décennie et s'est bâti une réputation en tant que méthode hautement efficace, fiable et sans danger pour le patient pour détecter la maladie avant même l'apparition des symptômes. Nous expliquerons de manière accessible ce qu'est ce type de diagnostic, quel est le principe de son fonctionnement, nous en noterons les avantages, nous orienterons le coût d'une telle analyse.

La réponse du corps à la flore pathogène

Afin de comprendre comment, grâce au dosage immunoenzymatique, les assistants de laboratoire diagnostiquent diverses maladies, il est nécessaire de comprendre le processus physiologique qui se produit dans le corps lors d'une infection par des infections. Lorsqu'un microorganisme pathogène pénètre dans la circulation sanguine, le système immunitaire humain démontre une réponse protectrice sous la forme de la libération de certaines substances - des anticorps. Ils entrent en contact avec la cellule et analysent si elle fait partie du corps ou a été introduite de l'extérieur. Si le système immunitaire détermine que la cellule est étrangère, la quantité d'anticorps commence à augmenter afin de lutter contre le micro-organisme pathogène.

Les anticorps sont de types différents, ont leurs propres caractéristiques. Certaines substances apparaissent directement pendant la période d'infection, d'autres restent tout au long de la vie dans le corps humain et c'est grâce à elles que se développe une immunité persistante à une maladie spécifique. Les structures protéiques sont réparties dans les types suivants: A, D, E, M, G. En médecine, les anticorps sont appelés immunoglobulines. Par conséquent, il est courant de désigner les indicateurs de ces substances par les lettres latines Ig.

Basé précisément sur des données issues des connaissances médicales. À l'aide d'antigènes spéciaux dans des conditions de laboratoire, il est possible de déterminer la présence ou l'absence de certains anticorps dans le matériel biologique. Sur la base des résultats d'une telle analyse, le médecin peut diagnostiquer et déterminer non seulement la présence d'une pathologie, mais également la prescription de son origine et identifier le niveau de danger pour le patient. Dans le test immunoenzymatique, la présence d'anticorps des groupes M et G est le plus souvent étudiée.

Qu'est-ce que l'ELISA?

En fait, le dosage immunoenzymatique n'est pas une innovation dans la société moderne. Il a été inventé dans les années 80. Mais pour mener à bien de telles études, il fallait un équipement encombrant et coûteux. Par conséquent, cette méthode n'était utilisée que dans des laboratoires scientifiques spécialement équipés: elle était utilisée pour le typage des cellules et des tissus. Mais il ne s'est pas répandu en médecine diagnostique à cette époque; il était techniquement difficile et extrêmement coûteux de l'utiliser. Ce n'est qu'avec le développement de la technologie et l'invention de matériaux biopolymères que l'ELISA a été amélioré. Après cela, la méthode a commencé à se populariser et à gagner la confiance de la communauté médicale.

Comme mentionné ci-dessus, cette méthode implique la détection de certains groupes d'immunoglobulines dans le biomatériau - sang, liquide amniotique, corps vitré ou liquide céphalo-rachidien.

Faire la distinction entre les études sans application d'antigène à la surface et le test d'immunosorbant lié à une enzyme, qui consiste à effectuer une réaction dans des puits spéciaux. Cette dernière méthode a une grande sensibilité et fiabilité, c'est ainsi que l'analyse est effectuée dans les laboratoires médicaux pour détecter les maladies humaines.

Phases du dosage immunoenzymatique

En fonction de la maladie suspectée, l'antigène nécessaire est utilisé dans le kit pour le dosage immunoenzymatique, qui, lors d'une réaction chimique en présence d'une infection, se liera à la flore pathogène. Ce processus s'appelle une réponse immunitaire.

Ensuite, afin de déterminer visuellement le résultat de l'étude, une phase enzymatique d'ELISA est réalisée. Il s'agit de colorer le matériau à l'aide de réactifs spéciaux. Dans cette étude, des enzymes telles que la phosphatase alcaline, la peroxydase et l'avidine sont utilisées. En fonction de la couleur résultante dans le processus de réalisation des réactions chimiques et déterminer le résultat du dosage immunoenzymatique.

Qu'est-ce que la colorimétrie?

L'analyse de la phase enzymatique du diagnostic est réalisée à l'aide d'une méthode appelée "colorimétrie". Le fait est que non seulement la couleur du matériau donne des informations sur l'infection, mais également la densité de la couleur obtenue à la suite de réactions chimiques. C'est cet indicateur qui détermine la concentration du microorganisme pathogène. Si la méthode de diagnostic manuel est utilisée à l'ancienne, un programme d'étalonnage spécial est construit pour déterminer les indicateurs indiqués.

Dans les laboratoires modernes, la méthode manuelle est rarement utilisée aujourd'hui. Pour effectuer l'analyse ELISA, un appareil spécial est utilisé - un colorimètre, dans lequel seuls les paramètres de recherche sont définis manuellement, puis tout le travail, y compris le tracé d'un graphique, est effectué automatiquement par l'appareil.

Méthodes ELISA

Distinguer les méthodes directes et indirectes de dosage immunoenzymatique. Le premier type prend moins de temps, car il n'a que 3 étapes d'exécution. Tout d'abord, des anticorps spécifiques sont ajoutés aux antigènes du matériel d'essai placé dans des puits spéciaux. Eliminer ensuite leur excès et effectuer la phase enzymatique de l'analyse, obtenant ainsi le résultat.

La méthode indirecte est utilisée beaucoup plus souvent, car elle a une sensibilité plus élevée que la méthode de diagnostic direct. Il utilise une double étude. A savoir, l'antigène est d'abord lié à un anticorps non marqué, puis à un anticorps marqué. Ce processus prend plus de temps, mais le résultat est également le plus précis.

Kits de réactifs

Les kits de dosage immunoenzymatique sont produits par différents fabricants, dans une variété de configurations. La société «Soyouz biomédical» est reconnue en Russie. Ce fabricant produit des kits de réactifs pour l'étude par ELISA de presque toutes les infections courantes sous nos latitudes qui peuvent être analysées de cette manière. En plus des réactifs eux-mêmes, les kits comprennent des matériaux supplémentaires, qui garantissent la sécurité, la commodité et la rapidité d'analyse. De plus, les substances chimiques sont colorées de différentes couleurs, ce qui réduit le risque d'erreurs dans le choix d'un réactif par un assistant de laboratoire.

Les kits chimiques et biologiques diffèrent par leur disponibilité relative, ce qui affecte directement la distribution et la disponibilité du dosage immunoenzymatique pour la population.

Les avantages de la méthode de diagnostic

Sans aucun doute, le test d'immunosorbant lié à une enzyme présente un certain nombre d'avantages par rapport aux autres méthodes de diagnostic:

1. Avec son aide, même une légère présence d'organismes pathogènes peut être déterminée, ce qui indique la haute sensibilité du test.
2. La capacité à détecter au maximum la maladie étapes préliminaires, ce qui augmente considérablement les chances de guérison.
3. Simplicité et commodité de prendre du matériel biologique. Cette analyse est réalisée à la fois dans des laboratoires privés et dans des laboratoires publics. Si nécessaire, l'infirmière peut emporter le matériel au domicile du patient.
4. L'analyse nécessite une très petite quantité de biomatériau.
5. Obtenez des résultats rapidement. Un équipement médical moderne vous permet d'effectuer l'analyse dans les 24 heures.
6. La capacité de détecter les formes asymptomatiques cachées d'infection.
7. Disponibilité de la recherche.
8. Si nécessaire, il est possible de mener des enquêtes de masse en utilisant cette méthode.
9. Il est possible de suivre l'évolution de la maladie et l'efficacité du traitement prescrit, car il est possible d'effectuer plusieurs fois l'analyse par ELISA en toute sécurité pour le patient.
10. Automatisation des étapes de l'analyse, ce qui élimine le facteur humain et augmente la fiabilité des résultats.
11. Les réactifs pour ELISA sont stockés pendant une longue période - environ un an.
12. L'analyse est possible avec les fluctuations de la température ambiante.

Immunoglobulines du groupe M

Les anticorps du groupe M sont produits par le système immunitaire immédiatement après la détection d'un antigène étranger. Par conséquent, si le test d'immunosorbant lié à une enzyme se termine par la détection de telles substances dans le biomatériau, cela indique un stade aigu de l'évolution de la maladie, une infection primaire. Les immunoglobulines du groupe M peuvent rester dans le corps jusqu'à un mois, selon le type d'infection. Ensuite, leur nombre diminue jusqu'à ce qu'ils disparaissent complètement.

Immunoglobulines du groupe G

Les immunoglobulines du groupe M sont remplacées par des structures protéiques de type G. Ces substances produisent une immunité stable, dans la plupart des cas, contre la maladie. La détermination de la structure protéique des IgG dans le matériel d'essai indique que l'organisme a déjà rencontré le pathogène et a une réaction protectrice contre la réinfection.

Indications diagnostiques

Un dosage immunoenzymatique est utilisé pour déterminer différents maladies infectieuses, conditions hormonales, faire des tests d'allergie. À savoir:

• déterminer le niveau d'hormones thyroïdiennes;
• les indicateurs du panel hormonal reproductif;
• marqueurs tumoraux;
• détecter les agents pathogènes de maladies infectieuses telles que le cytomégalovirus, l'hépatite, le toxoplasme, la rubéole, la rougeole, la tuberculose, la chlamydia, la syphilis, le mycoplasme, l'urplasma, le candida, la lamblia et même le VIH;
• diagnostiquer les maladies auto-immunes. Y compris souvent utilisé pour l'étude des immunoessais enzymatiques des hormones thyroïdiennes: TSH, TG, T3 et T4.

En plus à des fins de diagnostic, la méthode de dosage immuno-enzymatique est utilisée dans les activités médicales de recherche scientifique.

Comment le matériel est-il pris?

Dans la plupart des cas, un prélèvement de sang veineux est recommandé pour l'analyse. Après le traitement et la préparation du matériel pour l'étude, un dosage immunoenzymatique du sérum sanguin ou du plasma est effectué.

L'étude du panel hormonal nécessite une attention particulière, car dans ce cas, il est extrêmement important de prendre en compte les caractéristiques de la collection de matériaux. Par exemple, le diagnostic de la plupart des hormones du système reproducteur d'une femme nécessite la prise de sang veineux certains jours. cycle menstruel... Un certain nombre d'autres hormones sont affectées par des facteurs externes: la saisonnalité, l'heure de la journée, l'état psychologique du patient et bien plus encore. Sans prendre en compte des facteurs spécifiques, vous pouvez obtenir un faux résultat, ce qui entraînera une exacerbation de la maladie ou un traitement incorrectement prescrit.

Dans certains cas, plus souvent compliqués, l'analyse peut nécessiter du liquide céphalo-rachidien, de l'humeur vitréenne ou du liquide amniotique d'une femme enceinte. Les procédures de collecte de ces matériels biologiques comportent un certain risque, des contre-indications et une période de récupération. Par conséquent, un tel dosage d'immunosorbant lié à une enzyme ne doit être effectué que sur la foi du témoignage d'un médecin et sous sa supervision professionnelle. Le décryptage dans ce cas nécessite des connaissances médicales spéciales et peut prendre un certain temps.

Préparation à l'analyse

Un test d'immunosorbant lié à une enzyme doit être effectué conformément à toutes les recommandations, car des facteurs externes influencent les résultats de l'étude. Par exemple, il est important de donner du sang veineux à jeun le matin (avant 11 h 00). 2 semaines avant le prélèvement prévu du matériel, vous devez arrêter de prendre tout médicament, en particulier les médicaments hormonaux. Quelques jours avant l'étude, vous devez vous abstenir de boire de l'alcool et des aliments gras, et également exclure l'activité physique, l'anxiété et le stress.

Décoder les résultats

Le déchiffrement des résultats du test d'immunosorbant lié à une enzyme nécessite des connaissances particulières sur les caractéristiques des structures protéiques (anticorps), qui ont été décrites ci-dessus (IgG et IgM). Conformément à ces données, des indicateurs de recherche sont analysés. Le tableau décrit les options qui peuvent être obtenues lors de l'analyse:

En analysant le tableau présenté, nous pouvons conclure que dans la plupart des cas, des études supplémentaires seront nécessaires pour confirmer le diagnostic. L'immunoessai seul ne peut pas donner une réponse sans ambiguïté. La norme dans ce cas n'a pas de frontières claires: les protéines détectées du groupe G indiquent seulement que le corps a déjà été infecté par le pathogène déterminé. Mais le même résultat peut également indiquer la présence d'une phase aiguë - il est important de comparer de nombreux facteurs et indicateurs afin de poser le bon diagnostic.

Facteurs de risque

ELISA est précis à 90%. Pourtant, il existe des facteurs de risque qui affectent la distorsion du résultat du diagnostic: dysfonctionnement de l'équipement, échantillonnage incorrect des matériaux, stockage et transport, négligence d'autres facteurs externes.

Coût d'analyse

Le coût d'une étude diagnostique a une large gamme et dépend du type d'analyse et de l'antigène à déterminer, car le coût des kits de réactifs est calculé en fonction de ces facteurs et la complexité de l'analyse est déterminée. Mais dans la plupart des cas, un test immunoenzymatique est disponible pour de nombreux patients. Son prix est de 300 roubles. jusqu'à 2000 p.

ELISA est une méthode abordable, rapide et très efficace pour diagnostiquer un large éventail de maladies. Mais seul un professionnel de la santé qualifié a le droit de déchiffrer les résultats et de poser un diagnostic.

Un test d'immunosorbant lié à une enzyme est une méthode de diagnostic utilisée pour détecter les helminthes chez les enfants et les adultes.

Indication pour diriger

Les médecins prescrivent l'ELISA pour l'invasion dans les cas suivants:

• le nombre de leucocytes chez un patient dépasse considérablement la norme en l'absence de symptômes d'autres pathologies;
• s'inquiéter des étourdissements fréquents ou des maux de tête sans raison évidente;
• des réactions allergiques se produisent;
• submergé par des douleurs musculaires, une perte de force;
• la toux ne guérit pas pendant longtemps;
• parfois un état fébrile apparaît;
• la présence de vers est détectée chez les animaux de compagnie;
• la situation épidémiologique se détériore dans la région de résidence;
• la profession du patient est associée à un risque élevé d'infection par des vers (des diagnostics de routine sont effectués).

• troubles digestifs avec modifications des selles et de leur fréquence;
• maux d'estomac;
• colique dans le foie;
• nausée se transformant en vomissements;
• signes de lésions du système nerveux central: insomnie, nervosité accrue, sautes d'humeur soudaines.

Types ELISA

La réaction enzymatique vous permet d'étudier les types d'helminthes identifiés par les assistants de laboratoire avec une mesure visuelle des données les concernant.

Différents types d'ELISA sont pratiqués dans les laboratoires:

Comment prendre

Pour que les résultats de l'étude soient aussi fiables que possible, toutes les exigences du laboratoire doivent être strictement respectées. Il est nécessaire:

• 3 jours avant le don de sang, arrêtez de prendre tous les médicaments, à l'exception des médicaments vitaux;
• suspendre les procédures de physiothérapie 2 jours à l'avance;
• abandonner l'alcool et le café en 1 jour;
• à la veille de ne pas être exposé au stress physique et émotionnel;
• dîner au plus tard entre 19 et 20 heures (le matin, vous pouvez boire un peu d'eau).

Décodage

Numéro d'option 1. IgM-, IgA +, IgG-: maladie primaire (2 semaines après l'infection).

Numéro d'option 2. IgM +, IgA +, IgG-: maladie primaire (2,5 à 3 semaines à partir du moment de l'infection).

Numéro d'option 3. IgM +, IgA +, IgG +: primo-infection (3-4 semaines après l'infection).

Numéro d'option 4. IgM-, IgA +, IgG +: exacerbation de la maladie chronique (2 semaines après le début de l'exacerbation).

Numéro d'option 5. IgM-, IgA +/-, IgG +: phase chronique.

Numéro d'option 6. IgM-, IgA-, IgG +: infection guérie (passée), présence d'immunité.

Numéro d'option 7. IgM-, IgA, IgG ne sont pas détectés (ou une diminution du titre de 2 à 4 fois à la fin du traitement, 5 à 8 fois après 1 à 1,5 mois après le traitement): récupération.

Numéro d'option 8. IgM-, IgA-, IgG-: manque d'immunité contre l'infection.

Avantages et inconvénients

Il est extrêmement rare qu'un test produise des résultats faux positifs ou faux négatifs. Cette carence peut être due à des erreurs techniques. De tels résultats sont possibles avec le facteur rhumatoïde, les troubles métaboliques et d'autres maladies chroniques, dus à la production d'anticorps protecteurs, ainsi que lors de la prise de certains médicaments, tels que l'insuline.

La méthode ELISA détermine:

• ténias (ténias du porc);
• vers ronds (vers ronds, oxyures, toxocaras, strongyloïdite);
• vers plats (cestodes, douves, nématodes);
• trichinella;
• aux vers ronds - 935 roubles;
• à toxoplasma - 715-1000 roubles.

Trois variantes du dosage immunologique en phase solide sont le plus souvent utilisées dans la pratique - dosage immunologique indirect, dosage immunologique direct et dosage immunologique de type sandwich. Les différences entre ces types de dosages immunologiques sont les suivantes. Dans la version indirecte de l'immunoessai, à la première étape, l'antigène est sorbé à la surface des puits de la plaque de polystyrène. Après avoir retiré les molécules d'antigène non liées, un échantillon contenant des anticorps spécifiques de cet antigène est ajouté. Les complexes antigène-anticorps formés sont détectés à l'aide d'anticorps anti-espèce conjugués à n'importe quel marqueur (figure 1A). Dans la variante directe de l'immunanalyse, l'antigène adsorbé est détecté directement à l'aide d'anticorps spécifiques conjugués au marqueur (Fig. 1B). Dans le test immunologique de type sandwich, à la première étape, ce n'est pas l'antigène qui est sorbé à la surface de la plaque, mais des anticorps spécifiques de l'antigène étudié (anticorps de support). Après avoir éliminé les molécules d'anticorps non liées, un échantillon contenant l'antigène est ajouté. Pour détecter le complexe d'anticorps antigène-substrat formé, des seconds anticorps spécifiques d'un autre épitope d'antigène spatialement éloigné, conjugués à un marqueur, sont ajoutés (figure 1B). L'utilisation d'anticorps de type sandwich spécifiques de deux épitopes d'antigène différents dans un dosage immunologique permet d'obtenir une sensibilité et une spécificité élevées dans la détermination de l'antigène même dans des échantillons hétérogènes tels que le plasma sanguin.

Figure: 1. Principe des dosages immunologiques indirects (A), directs (B) et sandwich (C)

ELISA indirect

La méthode de dosage immunologique indirect est caractérisée par la mise en œuvre d'un processus en 3 étapes, au premier stade duquel l'antigène est adsorbé sur un plastique spécialement préparé, au deuxième stade, des anticorps spécifiques à celui-ci interagissent avec l'antigène et au troisième stade, des anticorps anti-espèce conjugués à une enzyme sont introduits dans le système, provoquant la réaction enzymatique indicatrice ... Dans cette méthode, la peroxydase de raifort est utilisée comme enzyme. La réaction est effectuée dans des plaques spéciales à 96 puits.

I. Sorption de l'antigène

Les puits d'une plaque 96 puits pour immunoessai adsorbent l'antigène 0,1-0,5 μg par puits dans 100 μl de solution saline tamponnée au phosphate (PBS). L'incubation est réalisée pendant 30 minutes à température ambiante et sous agitation sur un agitateur à plaque horizontale. Le lavage (2 fois) des molécules d'antigène non liées est effectué avec un tampon phosphate-solution saline contenant 0,1% de Tween-20 (PBST).

II. Blocage

Pour bloquer les sites de liaison non spécifiques, les puits de la plaque sont remplis de PBST et incubés pendant 10 à 15 minutes à température ambiante.

III. Titrage d'anticorps spécifiques

Le titrage peut être effectué à la fois le long des rangées horizontales et verticales du comprimé. Il est à noter que le titrage des anticorps est effectué dans le cas où il est nécessaire de sélectionner la concentration optimale d'anticorps ou de déterminer le titre. Dans le cas où la concentration optimale et / ou le titre d'anticorps sont déterminés, la dilution recommandée pour ces anticorps spécifiques est utilisée.

Lors du titrage, une dilution prête à l'emploi d'anticorps est introduite dans le premier puits d'une rangée - en moyenne, 1 à 10 μg par puits, puis une dilution séquentielle des anticorps dans les puits est effectuée. L'incubation avec des anticorps spécifiques est réalisée pendant 30 minutes à température ambiante et sous agitation sur un agitateur à plaque horizontale. Le lavage est effectué avec du PBST 3 fois.

IV. Ajout d'anticorps anti-espèces liés aux enzymes

Des anticorps polyclonaux anti-espèces conjugués à la peroxydase de raifort sont utilisés comme anticorps détecteurs (secondaires). Les plus couramment utilisés sont les anticorps de chèvre ou de lapin spécifiques de la molécule entière ou des fragments Fc d'anticorps spécifiques. La concentration des anticorps détecteurs est généralement indiquée par le fabricant comme une dilution de la solution mère (par exemple, 1: 1 000). L'incubation avec les anticorps secondaires est réalisée pendant 30 minutes à température ambiante et sous agitation sur un agitateur à plaque horizontale. Le lavage est effectué avec du PBST 5 à 6 fois.

La peroxydase de raifort catalyse la réaction d'oxydation du substrat avec du peroxyde d'hydrogène. L'O-phénylènediamine (OFD) est utilisée comme substrat de la peroxydase de raifort. À la suite de la réaction, un produit d'oxydation OPD coloré est formé.

Solution de substrat: à 10 ml de tampon de substrat (tampon de Na-citrate 0,1 M, pH 4,5), ajoutez 0,01 ml de peroxyde d'hydrogène à 30% et 0,2 ml de solution 50x OPD (340 mg d'OPD dans 10 ml d'alcool éthylique; conserver à –20 ° C).

L'incubation est réalisée pendant 10 minutes à température ambiante et sous agitation sur un agitateur à plaque horizontale.

V. Arrêt de la réaction enzymatique

Vi. Mesure de la densité optique

ELISA direct

La technique d'immunoanalyse directe ne présente que des différences mineures par rapport à la technique d'immunoanalyse indirecte. Ainsi, les étapes I et II sont les mêmes dans les deux types d'analyse. La différence réside dans le fait que dans la version directe du dosage immunologique au stade III, des anticorps spécifiques conjugués à un marqueur enzymatique sont utilisés. Si nécessaire, il est également possible de titrer des anticorps spécifiques conjugués avec un tag enzymatique, similaire à celui décrit précédemment pour les anticorps non conjugués. L'étape IV est omise et d'autres étapes (V-VII) sont réalisées de manière similaire à celle décrite ci-dessus pour le dosage immunologique indirect.

Test immunologique de type sandwich

Figure: 2. Représentation schématique d'un dosage immunologique de type sandwich. ATp - anticorps de support, ATd - anticorps détecteur, AG - antigène, M - marqueur lié de manière covalente à l 'anticorps détecteur, P - substrat sur lequel l' anticorps support est sorbé.

Dans cette variante du dosage immunologique (Fig. 2), une paire d'anticorps spécifiques d'épitopes spatialement distants de l'antigène étudié est utilisée.

I. Sorption du support d'anticorps

Dans les puits d'une plaque à 96 puits pour immunoessai, les anticorps substrats sont sorbés 1 à 2 μg par puits dans 100 μl de solution saline tamponnée au phosphate (PBS). L'incubation est réalisée pendant 30 minutes à température ambiante et sous agitation sur un agitateur à plaque horizontale. Le lavage (2 fois) des molécules d'antigène non liées est effectué avec une solution saline tamponnée au phosphate contenant 0,1% de Tween-20 (PBST).

II. Blocage

Pour bloquer les sites de liaison non spécifique, les puits de la plaque sont remplis de PBST et incubés pendant 10 à 15 minutes à température ambiante.

III. Incubation d'antigène

Dans les puits de la plaque contenant des anticorps pré-adsorbés, ajoutez 50 μl de la solution à tester ou des dilutions standard de l'antigène. Les dilutions d'antigène doivent être basées sur les PBST, car Tween-20 réduit la liaison non spécifique des molécules de protéines les unes aux autres et à la surface de la plaque. La solution d'essai et les dilutions d'antigène standard sont appliquées par paires (ou en 3 répétitions), en utilisant deux (trois) puits pour chaque dilution de protéine. L'incubation est réalisée à température ambiante pendant 30 minutes sous agitation constante. Le lavage est effectué avec une solution de PBST 3 fois.

IV. Incubation avec des anticorps liés aux enzymes

Dans les puits de la plaque, ajoutez 100 μl d'une solution d'anticorps spécifiques conjugués à un marqueur enzymatique. La concentration optimale d'anticorps conjugués est généralement indiquée par le fabricant (généralement une concentration de 2 à 4 μg / ml est utilisée). L'incubation avec des anticorps marqués aux enzymes est réalisée pendant 30 minutes à température ambiante et en agitant sur un agitateur à plaque horizontale. Le lavage est effectué avec du PBST 5 à 6 fois.

V. Réalisation d'une réaction enzymatique, accompagnée de l'apparition d'un produit coloré

Dans les puits, ajouter 100 μl de solution de substrat et incuber pendant 10 min à température ambiante sous agitation constante.

Vi. Arrêt d'une réaction enzymatique

Avant de mesurer la densité optique, la réaction colorée est arrêtée avec 0,5 M H2SO4. Après incubation, 50 µl d'une solution d'acide sulfurique 0,5 M sont ajoutés dans les puits avec la solution de travail OPD. Après cela, vous pouvez immédiatement commencer à mesurer la densité optique.

Vii. Mesure de la densité optique

La densité optique de la solution du produit coloré est mesurée à λ \u003d 490 nm à l'aide d'un spectrophotomètre à plaques.

version imprimée

Analyse par immunoessai (ELISA)

Immunoessai, ou méthode (ELISA) - détection des antigènes à l'aide des anticorps correspondants conjugués à l'enzyme-tag (peroxydase de raifort, bêta-galactosidase et / ou phosphatase alcaline). Après avoir combiné l'antigène avec le sérum immun marqué par une enzyme, le substrat / chromogène est ajouté au mélange. Le substrat est clivé par l'enzyme et la couleur du produit de réaction change - l'intensité de la couleur est directement proportionnelle au nombre de molécules d'antigène et d'anticorps liées.

Les composants sont détectés en ajoutant des anticorps ou des antigènes marqués. Si le résultat est positif, la couleur du chromogène change.

Dosage immunologique indirect en phase solide

Chaque fois après avoir ajouté un autre composant, les réactifs non liés sont retirés des puits par lavage.
I. Lors de la détermination des anticorps, le sérum sanguin du patient, le sérum d'antiglobuline marqué avec une enzyme et un substrat / chromogène pour l'enzyme sont successivement ajoutés dans les puits des plaques avec l'antigène sorbé.

II. Lors de la détermination de l'antigène, l'antigène (par exemple, le sérum sanguin avec l'antigène souhaité) est ajouté aux puits avec les anticorps sorbés, le sérum de diagnostic contre celui-ci et les anticorps secondaires (contre le sérum de diagnostic) marqués avec l'enzyme, puis le substrat / chromogène pour l'enzyme sont ajoutés.

ELISA de compétition pour la détermination des anticorps: les anticorps cibles et les anticorps marqués aux enzymes sont en compétition les uns avec les autres pour les antigènes sorbés sur la phase solide.

Détermination du marqueur peroxydase en utilisant une chimiluminescence améliorée. Développement de méthodes rapides de dosage immunoenzymatique réalisé à l'aide d'appareils portables. Synergie et degré de valorisation. L'intensité et la durée de l'émission lumineuse.

Test immuno-enzymatique avec chimioluminescence améliorée

INTRODUCTION

Le marqueur enzymatique peut être quantifié par diverses méthodes, par exemple en utilisant la colorimétrie, la fluorimétrie, la radiométrie et la potentiométrie.

Récemment, la chimioluminescence ou la bioluminescence a également été utilisée à cette fin. Les marqueurs enzymatiques, qui peuvent être déterminés par des réactions accompagnées d'une émission de lumière, sont présentés dans le tableau. 1. En général, la sensibilité des méthodes de détermination chimiques et bioluminescentes est très élevée, et si l'on utilise également l'amplification du signal d'un marqueur enzymatique, alors la sensibilité des méthodes d'immunoessai correspondantes doit être extrêmement élevée.

Les capacités de la méthode de bioluminescence ont été récemment démontrées par l'exemple de la détermination de la D-galactosidase. En utilisant une réaction couplée de galactose-déshydrogénase AOH: PMNooxidoreductase-luciférase bactérienne, 2 * 10 "22 mol / 3-galactosidase ont été détectés.

La peroxydase de raifort est largement utilisée comme marqueur dans le dosage d'immunosorbant lié à une enzyme, les méthodes d'obtention et de stabilisation des conjugués avec lesquelles sont bien étudiées.

La peroxydase du raifort est le plus souvent déterminée par colorimétrie, mais diverses chimies et réactions bioluminescentes peuvent également être utilisées à cette fin.

La détermination de la peroxydase a été étudiée en détail à l'aide d'une réaction chimioluminescente dans le système luminol-peroxyde d'hydrogène, renforcée par des composés phénoliques.

Cette approche pour déterminer l'activité de l'enzyme présente un certain nombre d'avantages par rapport aux autres méthodes de détermination; ses principales caractéristiques sont énumérées dans le tableau. 2.

Amplificateurs. Divers composés, y compris les 6-hydroxybenzothiazoles, tels que la luciférine, les phénols, les naphtols et les amines, ont la capacité d'améliorer l'émission de lumière dans la réaction d'oxydation du luminal avec du peroxyde d'hydrogène, catalysée par la peroxydase.

En figue. 1 montre les structures des représentants des substances de chaque classe. Le degré d'amplification de l'émission lumineuse dépend de la concentration des réactifs. Une dépendance typique de l'intensité de luminescence de la concentration de l'amplificateur dans la réaction du luminol avec le peroxyde d'hydrogène, catalysée par la peroxydase et renforcée par le 6-hydroxybenzothiazole, est représentée sur la Fig.

Synergie et degré de valorisation. Dans le système peroxydase - luminal - peroxyde d'hydrogène, l'effet du bleu

prisme, comme en témoignent les données du tableau. 3. Le degré d'amplification est influencé par de nombreux facteurs; néanmoins, une amplification d'émission lumineuse de plus de 500 fois a été obtenue.

En présence de certains amplificateurs, l'émission de lumière de fond dans le système luminol-peroxyde d'hydrogène est réduite. Lors de la détermination de l'activité de la peroxydase, cela permet d'augmenter le rapport signal sur bruit de plusieurs ordres de grandeur uniquement grâce à l'utilisation de tels amplificateurs.

Une augmentation de la luminescence est caractéristique de divers diacylhydrazides cycliques, sous l'action d'oxydants en présence de peroxndase. L'amélioration n'est pas observée dans le cas de certaines substances à activité peroxydase, par exemple l'hémoglobine, qui ne catalyse que des réactions colorimétriques.

Ce fait indique une plus grande spécificité de l'analyse par chimiluminescence améliorée par rapport aux méthodes colorimétriques. Les spectres de la lumière émise sont pratiquement les mêmes dans les réactions amplifiées et non amplifiées. Cela «suggère que l'amplificateur lui-même n'émet pas de lumière.

En l'absence d'activateurs, la chimioluminescence dans le système peroxydase-luminol-peroxyde est apparemment limitée par la réaction relativement lente de la peroxydase sous la forme du soi-disant composé II avec le luminol, à la suite de laquelle des radicaux luminol sont formés et la peroxydase est régénérée.

Les amplificateurs capables de réagir rapidement avec un tel composé peuvent augmenter l'émission de lumière, accélérant la conversion du composé II en peroxydase active.

Les produits de conversion de l'amplificateur peuvent alors réagir rapidement avec le luminol pour former des radicaux luminol supplémentaires et ainsi améliorer davantage l'émission de lumière. Les amplificateurs peuvent également agir sur les intermédiaires de peroxydase ™ inactifs, par exemple le composé III.

Réactifs

Un facteur important dans la détermination de l'activité peroxydase en utilisant une chimioluminescence améliorée est la pureté chimique des diacylhydrazides cycliques.

L'étude de divers échantillons de luminol a montré que les impuretés affectent négativement l'émission de lumière. À la suite de processus photochimiques et thermiques, le luminol se décompose partiellement et les impuretés qui en résultent affectent la cinétique et l'intensité de l'émission lumineuse.

Table 4 montre les résultats d'une comparaison de la pureté et des propriétés de certaines préparations de luminol disponibles dans le commerce, ainsi que du sel de sodium du luminol purifié par recristallisation dans une solution d'hydroxyde de sodium.

2. IMMUNOANALYSE CHIMIUMINESCENTE AMÉLIORÉE

Un dosage immunologique amélioré par chimioluminescence avec la peroxydase comme marqueur enzymatique a été utilisé pour identifier de nombreux composés. Un certain nombre d'exemples sont donnés dans le tableau. 5. Ces immunoessais utilisaient des méthodes d'extraction de complexes compétitifs et immuns, ainsi que les supports solides les plus couramment utilisés.

un rapport signal / bruit de fond dans la détermination chimioluminescente de la peroxydase de raifort avec amélioration par le l-iodophénol; 6 CCM - chromatographie sur couche mince.

figure. 3 montre un schéma pour la détermination de l'hormone folliculo-stimulante. Dans cette méthode, la limite de détection de la FSH sur une plaque de microtitrage est d'environ 0,01 ppm. La méthode se caractérise par une excellente reproductibilité à la fois dans un seul test et entre les tests.

La méthode de chimioluminescence améliorée a également été utilisée avec succès pour détecter une étiquette peroxydase dans l'étude de l'hybridation d'ADN.

MÉTHODE DES ANTICORPS FLUORESCENTS (MFA).

méthode quantitative utilisant un photomètre à plaques et analyse qualitative par détection photographique avec une sensibilité de quelques picogrammes.

Dispositifs

Plusieurs types de luminomètres sont actuellement disponibles dans l'industrie pour mesurer la lumière émise dans les réactions de chimioluminescence améliorée.

Certains de ces luminomètres ont été mis à niveau spécifiquement pour une meilleure analyse par chimiluminescence. L'intensité et la durée de l'émission de lumière dans les réactions avec une luminescence accrue ont facilité la création de luminomètres simples, dans lesquels des photodiodes au silicium ou un film photographique hautement sensible sont utilisés comme détecteurs.

De tels luminomètres sont relativement peu coûteux, portables et peuvent donc être utilisés en dehors du laboratoire. Actuellement, MAST Immunosystems produit des caméras spéciales pour la détection par chimioluminescence dans la méthode ELISA d'immunoglobuline E spécifique à un allergène. On peut supposer qu'à l'avenir, des kits avec enregistrement photographique des résultats ELISA et d'autres composés seront créés, dont la détermination doit être effectuée dans les cliniques, les hôpitaux ou à domicile.

Appareils fabriqués et kits de réactifs.

Des kits d'immunoanalyse enzymatique de chimioluminescence améliorée et des instruments associés sont maintenant disponibles sous le nom d'Amerlite d'Amersham International pic.

L'analyse est réalisée sur des bandes de plaques de microtitration blanc, et la mesure de luminescence est effectuée rapidement et automatiquement par un luminomètre dédié à la microplaque.

Actuellement, des kits sont disponibles pour la détermination de l'hormone stimulant la thyroïde, de la choriogonadotrophine humaine, de l'antigène carcinoembryonnaire, de l'alpha-foetoprotéine, de la thyroxine, de la triiodothyronine et pour la détermination de l'indice de thyroxine libre. Ces analyses ont une sensibilité élevée et une excellente reproductibilité.

CONCLUSIONS

La détermination du marqueur peroxydase à l'aide de la chimioluminescence améliorée est très sensible, spécifique et simple, et peut servir de base pour le développement de méthodes ELISA pratiques et rapides réalisées à l'aide d'instruments portables peu coûteux.

Principes de l'immunoanalyse enzymatique, principaux types d'ELISA, application au diagnostic

Méthodes d'analyse immunitaire dans la pratique médicale, l'interaction de l'antigène et des anticorps à sa base.

Types d'analyses immunitaires en fonction du type d'étiquette et des conditions de test. Caractérisation des composants utilisés dans le dosage immunoenzymatique.

résumé, ajouté le 11/07/2011

Réactions sérologiques

Réactions sérologiques sous forme de réactions entre antigènes et anticorps in vitro.

Classification des réactions sérologiques en fonction de la nature et de l'état physique de l'antigène. Réaction de précipitation sur gel d'Ouchterloni. Dosage immunoenzymatique Mktod.

présentation ajoutée le 06/03/2015

Analyse spectrale de l'électrocardiogramme

Moyens d'enregistrement et d'analyse des électrocardiogrammes. Comparaison du traitement du signal analogique et numérique.

Investigation des signaux électrocardiographiques obtenus à l'aide d'un électrocardiographe ultra-haute résolution. Capacités d'analyse à l'aide du package MatLab.

résumé, ajouté le 12.09.2011

Application des rayonnements en médecine

Traitement l'asthme bronchique rayonnement infrarouge. Sources artificielles de rayonnement ultraviolet (UV) en médecine. Lampes germicides sans ozone ni ozone.

Désinfection de l'eau potable par rayonnement UV. Diagnostic par rayons X, appareil de l'appareil.

résumé, ajouté le 27/08/2009

Acromégalie

L'acromégalie est une maladie associée à une production accrue d'hormone de croissance (hormone somatotrope). Le tableau clinique de la maladie. Un indicateur de laboratoire caractéristique de l'acromégalie au moment du diagnostic. Test de Tirolibérine. Traitement aux rayons X.

présentation ajoutée le 05/03/2012

Marqueurs tumoraux dans la pratique clinique

L'utilisation de l'analyse de laboratoire pour le diagnostic du cancer et le suivi postopératoire de l'efficacité de la chirurgie et de la chimiothérapie.

Détermination des marqueurs tumoraux par dosage immunoenzymatique, immunoluminescence et radioimmunoessai.

résumé, ajouté le 10/09/2010

Méthodes physico-chimiques d'analyse des médicaments

Classification des méthodes d'analyse physiques et chimiques. Analyse spectrale d'absorption moléculaire. Lois d'absorption des radiations. Colorimétrie visuelle. Détermination de la concentration en photoélectrocolorimétrie. Spectrophotométrie des médicaments.

résumé, ajouté le 14/11/2010

Les principaux domaines d'application de la chimioluminescence activée

Le mécanisme des réactions accompagnées de la lueur des organismes vivants, visible à l'œil nu.

Utilisation de la chimioluminescence et de la bioluminescence activées comme outil dans les études biomédicales du sérum sanguin, de l'urine, du liquide céphalo-rachidien et de la salive.

term paper, ajouté le 25/10/2011

Méthodes modernes de diagnostic des maladies infectieuses

Méthodes de diagnostic des maladies animales infectieuses.

Réaction en chaîne par polymérase. Immunoessai, ses objectifs. Diagnostic des infections causées par les staphylocoques, les pneumocoques et les salmonelles. L'agent causal de la brucellose, son diagnostic.

résumé ajouté le 26/12/2013

Étiquettes luminescentes

Le concept de luminescence, sa nature physique et les raisons de son apparition.

Règle de Stokes. Types de luminescence (photoluminescence, chimioluminescence) et son rendement. Lois de base du rayonnement thermique. Analyse luminescente, qualitative et quantitative des substances.

présentation ajoutée le 05/05/2016

Ischémie cardiaque

1.1 Classification IHD

Le DHI comprend plusieurs maladies dont les manifestations cliniques diffèrent considérablement.

Clinique de pulpite chronique: fibreuse, hypertrophique, gangréneuse

Classification

Pulpite aiguë hyperémie pulpaire séreuse limitée séreuse diffuse purulente traumatique Pulpite chronique fibro-gangréneuse hypertrophique (proliférative) Exacerbation de la pulpite chronique Chronique ...

Mammite lactationnelle

4.

Classification

Classification chirurgicale de la mammite: I. En raison de la maladie: 1. Non spécifique. 2. Spécifique. II. Par l'état fonctionnel du sein: 1. Allaitement.

Immunoessai (ELISA)

2. Non-lactation. III. Avec le flux processus inflammatoire: 1. Sharp. 2. Chronique. IV ...

Plantes médicinales et matières premières végétales médicinales utilisées en médecine pour la lithiase urinaire

1.1 Classification

L'urolithiase peut être classée en fonction de l'emplacement des calculs: calculs des reins et des uretères (néphrourétérolithiase), calculs vessie... La subdivision de la lithiase urinaire est possible en fonction de la composition des calculs ...

Cancer du larynx

3.

Classification

Selon la classification domestique du cancer du larynx (Recueil d'instructions du ministère de la Santé, 4 étapes sont distinguées: Stade I: la tumeur n'occupe qu'une partie d'une partie du larynx ne pénètre pas plus profondément que la sous-muqueuse ...

Cancer de la vessie

2. Classification

Les néoplasmes de la vessie sont principalement représentés par un carcinome à cellules transitionnelles.

Néanmoins, pour éviter les erreurs de diagnostic, il ne faut pas oublier ...

Carcinome œsophagien

Classification

Classification histologique internationale des tumeurs de l'œsophage (1990): tumeurs épithéliales. Tumeurs bénignes. Papillome épidermoïde. Verrue virale. Adénome. Tumeurs malignes.

Carcinome squameux ...

Plaies, classification des plaies, antiseptiques mécaniques dans le traitement des plaies

Classification des plaies

Il existe plusieurs classifications de blessures. Par la nature des lésions tissulaires, les plaies se distinguent: coup de couteau, coupure, coupure, ecchymose, lacération, morsure, empoisonnement, balle. Les blessures par piqûre sont infligées avec une arme poignardante (baïonnette, aiguille, etc.) ...

Sources végétales de tanin et leurs usages médicinaux

2.

Classification

Tous les tanins sont divisés en groupes de tanins: hydrolysables et condensés. Les tanins hydrolysés sous l'action d'acides minéraux dilués, de bases et d'enzymes de tanninacyl hydrolases se décomposent en glucides et en acides phénolcarboxyliques ...

Réadaptation des enfants atteints de paralysie cérébrale

1.2 Classification de la paralysie cérébrale.

Actuellement, la Fédération de Russie utilise la classification de K.A.

Semenova (1974). - diplégie spastique - il y a une lésion prédominante des jambes; - double hémiplégie - tétraparésie spastique, les mains sont légèrement plus touchées ...

Polyarthrite rhumatoïde

1. Classification

La polyarthrite rhumatoïde est au centre de la science rhumatologique depuis des décennies, reflétant la grande importance de la maladie en termes médicaux et sociaux généraux ...

Le rôle des traitements non médicamenteux de l'asthme bronchique

1.1.1 Classification

L'asthme bronchique (BA) est divisé en une phase d'exacerbation (la hauteur de la maladie) et de rémission (lorsqu'il n'y a pratiquement aucun signe de la maladie).

Lors de l'apparition de l'asthme, on distingue une période de précurseurs (éternuements, écoulement nasal, etc. ...

Le rôle d'un paramédical dans le diagnostic, le traitement et la prévention du tétanos. Mesures anti-épidémiques au centre des maladies infectieuses. Dynamique et analyse comparative des maladies tétaniques dans le district de Salsky pour la période 2013-2014

1.4 Classification

Les caractéristiques de classification tiennent compte de divers facteurs - le mécanisme de l'infection, la prévalence et la gravité du syndrome convulsif, les caractéristiques de l'évolution clinique.

En tenant compte de ces facteurs, on distingue les formes suivantes de tétanos: 1 ...

Le rôle du paramédical dans l'organisation et la mise en œuvre de mesures diagnostiques, thérapeutiques et préventives pour lutter contre l'hypertension

1.2 Classification

Au cours de toute l'étude de la maladie, plus d'une classification de l'hypertension a été développée: selon l'apparence du patient, les raisons de l'augmentation de la pression, l'étiologie, le niveau de pression et sa stabilité, le degré de lésion des organes, la nature du cours ...

Diabète

1.1 Classification

Il existe plusieurs types de classification diabète sucré, qui sont basés sur le tableau clinique, l'étiologie, le degré de compensation du métabolisme glucidique, la sévérité du traitement, les complications ...

Immunoessai (ELISA) - la recherche moderne en laboratoire, au cours de laquelle une recherche d'anticorps spécifiques dans le sang ou d'antigènes de maladies spécifiques est effectuée afin d'identifier non seulement l'étiologie, mais également le stade de la maladie.

Les résultats ELISA peuvent être délivrés qualitativement et quantitativement.

ELISA est actuellement utilisé dans les situations suivantes:

1) Rechercher des anticorps spécifiques à toute maladie infectieuse;
2) recherche d'antigènes de toutes maladies (infectieuses, vénériennes);
3) étude de l'état hormonal du patient;
4) examen des marqueurs tumoraux;
5) examen de la présence de maladies auto-immunes.

Les avantages de la méthode ELISA:

1) Spécificité et sensibilité élevées de la méthode ELISA (plus de 90%).
2) Possibilité de déterminer la maladie et de suivre la dynamique du processus, c'est-à-dire de comparer la quantité d'anticorps à différents intervalles de temps.
3) Disponibilité des diagnostics ELISA dans n'importe quel établissement médical.

Désavantage relatif:

1) Identification de la réponse immunitaire (anticorps), mais pas du pathogène lui-même.

Concepts de base

Avant de clarifier l'essence de la méthode ELISA, comprenons brièvement certains des concepts.
Anticorps (ou immunoglobulines - Ig) - protéines spécifiques produites par B -
lymphocytes (cellules immunitaires) en réponse à l'ingestion de tout agent pathogène infectieux (virus, bactéries, champignons, etc.).

Il existe des immunoglobulines A (IgA), des immunoglobulines E (IgE), des immunoglobulines M (IgM), des immunoglobulines G (IgG), des immunoglobulines D (IgD). Ils diffèrent les uns des autres par la forme et le poids moléculaires, la demi-vie, la participation / non-participation aux processus infectieux, le moment de la détection à partir du moment de l'infection. Si l'on considère le poids moléculaire, il s'agit surtout d'IgM - c'est un pentamère (950000 daltons), contrairement aux autres Ig (de 150 à 200000 Da), à cause desquels les IgM ne peuvent tout simplement pas traverser la barrière placentaire.

Par conséquent, la détection d'IgM chez un enfant de 1 an est toujours le signe d'une infection chez le fœtus. Dans le sérum sanguin, la majeure partie des immunoglobulines est représentée par l'IgG (75-85%) et la plus faible est l'IgE (0,003%). Seules les IgA, M, G sont directement impliquées dans le processus infectieux. Les IgE sont un signe de réactions allergiques et de maladies, et les IgD ne peuvent être trouvées que dans les tissus des ganglions lymphatiques et des amygdales, jouent un rôle dans la formation de l'immunité locale.

Classes d'immunoglobulines

Les antigènes - les substances de haut poids moléculaire d'origine organique, en particulier les agents pathogènes de maladies infectieuses et autres, ainsi que les substances de diverses cellules altérées formées dans une maladie particulière (maladies auto-immunes, oncologie).

Complexe immunitaire - un complexe antigène-anticorps impliqué dans le processus immunitaire.

Sur quoi repose la méthode ELISA?

Il existe plusieurs types d'ELISA (méthode directe, indirecte, bloquante, compétitive), cependant, dans la pratique, le test immuno-absorbant hétérogène en phase solide ou ELISA (test immuno-enzymatique) est le plus souvent utilisé

La base de l'immunoessai enzymatique est la réponse immunitaire de l'antigène et de l'anticorps avec la formation d'un complexe immun: antigène-anticorps, à la suite de quoi il y a un changement dans l'activité enzymatique de marqueurs spécifiques à la surface des anticorps.

L'essence de la méthode ELISA

En termes simples, ce processus peut être divisé en plusieurs étapes:

1) À la surface des puits du comprimé du médecin effectuant l'examen, il y a un antigène purifié d'un certain agent pathogène.

Lorsqu'un matériel biologique (sérum sanguin) est ajouté à un patient, une réaction spécifique se produit entre cet antigène et l'anticorps souhaité (immunoglobuline). Ce composé agira comme un "antigène spécial" à l'étape suivante.

2) A ce stade, la formation d'IC \u200b\u200b(complexes immuns) a lieu - une réaction entre un "antigène spécial" et un conjugué (il s'agit d'une immunoglobuline marquée avec l'enzyme peroxydase). Un chromogène spécial est ajouté. Le résultat d'une telle réaction enzymatique est la formation d'une substance colorée dans le puits de la plaque, dont l'intensité de la couleur dépend de la quantité d'immunoglobulines (anticorps) contenue dans le matériel du patient.

3) Ensuite, le résultat est évalué: photométrie à l'aide d'un spectrophotomètre multicanal, comparaison de la densité optique du matériau à tester avec la densité optique des échantillons témoins, traitement mathématique des résultats.

La quantité d'anticorps chez un patient dépend directement de la hauteur de la densité optique d'un puits donné.

Typiquement, des plaques à 96 puits sont utilisées en pratique.

Lors de la mesure de la densité optique (DO) du liquide d'essai, la quantité (ou concentration) d'anticorps dans une certaine unité de volume est calculée.

Le résultat est ensuite comparé à un échantillon témoin.

Rappelles toi:pour chaque système de test, des indicateurs individuels sont développés pour rendre compte des résultats, des indicateurs de norme et de pathologie (c'est-à-dire des «valeurs de référence»). Cela doit être pris en compte lors de l'évaluation des résultats de chaque étude spécifique. Il est inapproprié d'interpréter les résultats d'un laboratoire en fonction des «valeurs de référence» d'un autre laboratoire.

Il est également incorrect de comparer les résultats de différents laboratoires entre eux.

Lors de la mise en place des réactions ELISA, le concept d'avidité des anticorps est également important.
Avidité des anticorps - c'est la force de la liaison de l'anticorps à l'antigène et la quantité d'antigène associée aux immunoglobulines (anticorps).

L'avidité est d'une grande importance pour évaluer la durée estimée de l'infection, ce qui est extrêmement important dans le diagnostic de la primo-infection chez la femme enceinte.

La base du test d'avidité des anticorps consiste à traiter le complexe immun (antigène-anticorps) avec une solution d'urée afin de détruire la protéine.

Les obligations très avides restent intactes, tandis que les obligations peu avides sont détruites. Le résultat est affiché sous forme d'indice d'avidité exprimé en pourcentage (%).

Quelles maladies sont détectées à l'aide des diagnostics ELISA?

Marqueurs de maladies auto-immunes et indicateurs de l'immunité humaine (IgE totales, IgG totales, IgA totales, IgM totales, IgD totales, IgA sécrétoires, IgG 2, IgG4, complexes immuns circulants CEC, IgA et IgG contre la gliadine et autres)

3. Marqueurs oncologiques (TNF - facteur de nécrose tumorale, CEA - antigène cancéreux embryonnaire, PSA - antigène prostatique spécifique, CG - gonadotrophine chorionique, CA 125, alvéomucine et bien d'autres)

Troubles de la reproduction (estradiol, progestérone, prolactine, testostérone, AFP-alpha-foetoprotéine, FSH-hormone folliculo-stimulante et autres)

5. Maladies de la glande thyroïde (T3 libre et associée, T4, thyroglobuline, peroxydase thyroïdienne - TPO, hormone thyréostimulante - TSH).

Cette liste n'est pas présentée pour toutes les maladies diagnostiquées à l'aide d'un dosage immunoenzymatique.

Matériel pour l'analyse ELISA et règles pour sa collecte

Le matériau le plus courant pour la réaction ELISA est le sérum sanguin du patient pris à jeun.

Le matériau peut également servir de liquide céphalo-rachidien, de liquide amniotique, de contenu du corps vitré, de mucus du canal cervical et de l'urètre, de frottis.

Préparation des patients à la livraison de matériel pour ELISA

Le sang est prélevé à jeun. Vous n'avez pas besoin de prendre de médicaments avant de donner du sang.

Le dosage immunologique du matériel est réalisé rapidement, en une journée.

Les retards peuvent être dans différents laboratoires en raison de l'accumulation d'une certaine quantité de sérums.

Résultats possibles des diagnostics ELISA

Lors de l'évaluation des résultats d'infections spécifiques, la classe d'anticorps détectés et leur quantité sont importants.

Cela détermine non seulement la question de l'étiologie de l'infection (qu'elle soit présente ou non), mais également le stade attendu de la maladie (aiguë, chronique), ainsi que la présence d'une infection active (aiguë ou exacerbation de chronique) au moment de l'examen.

Quel est le moment approximatif de l'apparition des anticorps (immunoglobulines - Ig)?

Les premiers anticorps sont les IgM.

Test immuno-enzymatique (ELISA)

Ils peuvent être détectés en 1 à 3 semaines après une éventuelle infection, ce qui caractérise la phase aiguë du processus infectieux. La deuxième situation d'apparition des anticorps IgM est l'activation (ou l'exacerbation) d'un processus chronique. Les anticorps IgM circulent en moyenne pendant environ 3 mois, puis leur nombre disparaît progressivement. Cependant, chez certains patients, des traces d'IgM peuvent être détectées dans les 1 à 2 ans suivant l'infection.

Les systèmes de test modernes sont très sensibles, ce qui entraîne des résultats faussement positifs non spécifiques (souvent chez les femmes enceintes).

Par conséquent, dans ce groupe de patients, les IgM positives doivent être revérifiées!

Les anticorps IgA apparaissent 2 à 4 semaines après l'infection, mais en quantité suffisante pour la détection - après un mois. L'IgA sérique est synthétisée par les plasmocytes de la rate, des ganglions lymphatiques et des muqueuses, l'IgA sécrétoire se concentre sur les muqueuses pour remplir leur fonction de protection - participer à l'immunité locale.

Dès la 4ème semaine après l'infection, des anticorps IgG commencent à apparaître.

Dans la plupart des infections, leur titre augmente progressivement avec un maximum à différents moments (en moyenne, après 1,5 à 2 mois), puis le titre reste à un niveau bas et indique une immunité. Dans certaines maladies (mycoplasmose, chlamydia, trichomonase), le taux d'IgG n'est pas élevé, il diminue significativement en raison du manque d'immunité dans ces infections.

Options de détection pour les anticorps de différentes classes:

- La détection isolée des anticorps IgM suggère une
infection.
- La détection simultanée d'IgM et d'IgG dans le sang est caractéristique de la primo-infection
au cours des 2-3 mois précédents, ainsi qu'avec une exacerbation d'une maladie chronique.

Par conséquent, pendant la grossesse, la présence d'IgM n'est pas toujours un signe de primo-infection.
- La détection des IgG isolément peut indiquer une immunité à cette maladie,
et une infection chronique. Dans la seconde situation, la quantité d'anticorps (titre) et l'évolution de ce titre dans le temps sont importantes. Habituellement, les études sont effectuées à des intervalles de 2-4-6 semaines.
- La détection des IgA isolées ou avec des IgM indique une primo-infection. Quand
on s'attend à ce que l'apparition d'IgA et d'IgG déclenche une infection chronique (en moyenne 2 semaines à partir du moment de l'exacerbation).

Détermination de l'avidité anticorps IgG est une excellente étape complémentaire dans le diagnostic de l'infection primaire à partir d'une infection ancienne, qui a signification clinique, tout d'abord, lors de l'évaluation du risque d'infection intra-utérine du fœtus.

La détection des IgG de faible avidité indique une infection primaire et est détectée en moyenne 4 à 6 mois après l'infection, moins souvent plus longtemps. Les IgG aviaires faibles nécessitent une autre confirmation en laboratoire de l'infection primaire (IgM).

Les anticorps hautement avides sont soit le signe d'une maladie chronique et de son exacerbation, soit une immunité formée.

Caractéristiques chez les nourrissons:chez les enfants de moins d'un an, et parfois même de 1,5 ans, les IgG maternelles contre diverses infections circulent dans le sang (c'est-à-dire qu'elles pénètrent à travers le placenta de la mère au fœtus au cours du développement intra-utérin).

Ils ne sont pas en eux-mêmes un signe d'infection actuelle. Si des IgM sont détectées à cet âge (rappelez-vous que les IgM maternelles ne peuvent pas pénétrer dans le placenta), il s'agit d'un signe d'infection intra-utérine ou d'une infection acquise après la naissance.

Méthode ELISA quantitative

Le résultat du diagnostic ELISA (utilisant un analyseur d'immunoanalyse enzymatique) est donné dans certaines unités de mesure:
- Densité optique (DO) de l'échantillon - la concentration d'anticorps spécifiques par unité de volume.

Plus la DO de l'échantillon est élevée, plus la concentration d'anticorps est élevée. Certains résultats se réfèrent au coefficient de positivité (CP), qui est également la densité optique de l'échantillon.
- Unités de concentration d'anticorps (nanogramme / millilitre ou ng / ml).

- Sous forme de titres sériques: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 et ainsi de suite. Les titres diagnostiques (dans lesquels le diagnostic est fait de la maladie et non du fait de l'infection) sont différents pour différentes maladies.
- Sous forme de symboles - "+", "-", "?" (+, ++, +++, ++++).
- Sous la forme d'une évaluation qualitative selon un critère donné (positivement ou négativement).

Seul un médecin peut estimer correctement la quantité d'anticorps, une variante de la détection de classe des immunoglobulines, et, par conséquent, définir le stade de la maladie et la nécessité d'un traitement.

Il ne faut pas oublier que pour tout système de test, ses propres «valeurs de référence» (variantes de la norme) sont développées, lorsqu'elles sont dépassées, telle ou telle maladie est diagnostiquée (variantes de pathologie).

Pour différents systèmes de test, les «valeurs de référence» sont différentes.

Une comparaison correcte des résultats ELISA pris en dynamique n'est possible que s'ils sont réalisés dans le même laboratoire.

Médecin spécialiste des maladies infectieuses N.I. Bykova